TÉCNICAS PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO DE LEVADURAS

Esteban Osorio Cadavid, Ph.D.
Profesor Titular sección de Genética, Departamento de Biología, Universidad del Valle, Cali-Colombia.
E-mail: esteban.osorio@correounivalle.edu.co

Para las levaduras hay diferentes formas de realizar extracción de ADN genómico. Dependiendo de la metodología a emplear, se requieren del uso de solventes químicos o enzimas que permitan destruir el material celular y macromoléculas y separar el ADN. Además, se requiere de ADN de buena calidad para realizar experimentos basados en amplificación y secuenciación. En este trabajo se muestra un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN
en alta concentración (124,9±30,2 ng/μl) y de buena calidad (A260/A280 nm = 1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia.